Laktatdehydrogenase-Test

Wir wissen, dass es im wirklichen Leben verschiedene Enzyme gibt. Diese Enzyme können allein oder in Wechselwirkung miteinander wirken und einen großen Einfluss auf unseren menschlichen Körper haben. Ich glaube jedoch, dass nicht jeder mit der Bestimmungsmethode von Enzymen sehr vertraut ist. Unterschiedliche Enzyme haben unterschiedliche Bestimmungsmethoden, und die Methoden sind auch unterschiedlich. Heutzutage ist die Bestimmungsmethode von Laktatdehydrogenase für viele Menschen zu einem Forschungsthema geworden. Wie kann man sie also bestimmen? Lassen Sie uns etwas über die Bestimmungsmethode von Laktatdehydrogenase lernen.

Verfahren:

Bereiten Sie vor Beginn des Experiments alle Reagenzien vor. Wenn Sie Reagenzien oder Proben verdünnen, müssen diese gleichmäßig vermischt werden. Versuchen Sie, Schaumbildung während des Mischens zu vermeiden. Für jeden Test sollte eine Standardkurve erstellt werden. Wenn die Probenkonzentration zu hoch ist, verdünnen Sie sie mit Probenverdünner, damit die Probe in den Nachweisbereich des Kits passt.

1. Probenzugabe: Richten Sie Blindprobenbehälter, Standardprobenbehälter und Behälter für die zu testenden Proben ein. Geben Sie 100 μl Probenverdünner in die leere Vertiefung und 100 μl Standard- oder Testprobe in die übrigen Vertiefungen. Achten Sie darauf, dass keine Blasen entstehen. Geben Sie die Probe auf den Boden der Vertiefung der ELISA-Platte, versuchen Sie, die Vertiefungswand nicht zu berühren, schütteln Sie sie vorsichtig, um sie zu vermischen, bedecken Sie die ELISA-Platte oder decken Sie sie ab, und lassen Sie sie 120 Minuten lang bei 37 °C reagieren.

Um die Gültigkeit der Versuchsergebnisse sicherzustellen, verwenden Sie bitte für jeden Versuch eine neue Standardlösung.

2. Flüssigkeit wegschütten, trockenschleudern, nicht waschen. Geben Sie 100 μl der Arbeitslösung mit biotinmarkiertem Antikörper in jede Vertiefung (bereiten Sie 1 μl des biotinmarkierten Antikörpers mit 99 μl des Verdünnungsmittels mit biotinmarkiertem Antikörper vor, mischen Sie vorsichtig und bereiten Sie die Lösung innerhalb einer Stunde vor der Verwendung vor) und inkubieren Sie sie 60 Minuten lang bei 37 °C.

3. Nach einer Inkubation von 60 Minuten die Flüssigkeit aus den Vertiefungen verwerfen, trockenschleudern, die Platte dreimal waschen, dabei jedes Mal 1–2 Minuten einweichen (350 μl/Vertiefung) und trockenschleudern.

4. Geben Sie 100 μl der mit Meerrettichperoxidase markierten Avidin-Arbeitslösung (dieselbe wie die mit Biotin markierte Antikörper-Arbeitslösung) zu jeder Vertiefung hinzu und inkubieren Sie sie 60 Minuten lang bei 37 °C.

5. Nach 60-minütiger Inkubation die Flüssigkeit aus den Vertiefungen verwerfen, trockenschleudern, die Platte fünfmal waschen, dabei jedes Mal 1–2 Minuten einweichen (350 μl/Vertiefung) und trockenschleudern.

6. Geben Sie nacheinander 90 μl Substratlösung zu jeder Vertiefung hinzu und entwickeln Sie bei 37 °C im Dunkeln eine Farbe (innerhalb von 30 Minuten weisen die ersten 3–4 Vertiefungen des Standards einen klaren, mit bloßem Auge sichtbaren Blauverlauf auf, während der Verlauf in den letzten 3–4 Vertiefungen nicht offensichtlich ist und der Vorgang abgebrochen werden kann).

7. Geben Sie 50 μl Stopplösung in jede Vertiefung, um die Reaktion zu beenden (die blaue Farbe wird sofort gelb). Die Reihenfolge der Zugabe der Stopplösung sollte der Reihenfolge der Zugabe der Substratlösung möglichst ähnlich sein. Um die Genauigkeit der Versuchsergebnisse sicherzustellen, sollte die Stopplösung so bald wie möglich nach Ablauf der Substratreaktionszeit hinzugefügt werden.

8. Verwenden Sie einen Enzymimmunoassay (ELISA), um die optische Dichte (OD-Wert) jeder Vertiefung nacheinander bei einer Wellenlänge von 450 nm zu messen. Führen Sie den Test innerhalb von 15 Minuten nach Zugabe der Stopplösung durch.

Der obige Inhalt führt uns in die Methode zur Bestimmung der Laktatdehydrogenase ein. Ich glaube, dass dieser Inhalt jedermanns Interesse wecken kann. Ich glaube, dass jeder die Laktatdehydrogenase effektiv, schnell und direkt bestimmen kann. Vielleicht sind Sie auch ein Forschungsenthusiast, also beeilen Sie sich und üben Sie es!